Analisa Kadar Protein dengan Metode Kjeldahl

1. Tahap Destruksi

Sampel dipanaskan dengan asam sulfat pekat sehingga terjadi destruksi menjadi unsur-unsurnya.

C dioksidasi menjadi CO, CO2

H dioksidasi menjadi H2O

N diubah menjadi (NH4)2SO4

Perhitungan kebutuhan asam sulfat:

Satu gram protein diperlukan 9 gram H2SO4.

Satu gram lemak diperlukan 17,8 gram H2SO4.

Satu gram karbohidrat diperlukan 7,3 gram H2SO4.

Sampel 0,4-3,5 gram mengandung 0,02-0,04 gram Nitrogen, untuk mikro Kjeldahl (10-30 mg).

Diperlukan 10 mL (18,4 gram) H2SO4.

Katalisator :

Untuk mempercepat proses destruksi ditambahkan katalisator : campuran Na2SO4 dan HgO (20:1)

Gunning menganjurkan menggunakan K2SO4 atau CuSO4.

Dengan penambahan katalisator titik didih H2SO4 akan dipertinggi sehingga destruksi lebih cepat.

Setiap satu gram K2SO4 dapat menaikkan titik didih tiga derajat celcius. Kadang-kadang juga ditambah selenium sedikit (0,25 gram), selain menaikkan titik didih juga percepat oksidasi.

Suhu destruksi berkisar antara 370-410 derajat celcius.

Reaksi yang terjadi :

HgO + H2SO4 —–> HgSO4 + H2O

2HgSO4 —–> Hg2SO4 +SO2 + On

Hg2SO4 + H2SO4 —–> 2HgSO4 +SO2 + 2H2O

(CHON) + On + H2SO4 —–> CO2 + H2O + [NH4]2SO4

Bial menggunakan katalis Hg, sebelum didestilasi diendapkan dulu dengan K2S atau Tiosulfat agar komplek Hg-amonia pecah menjadi am-sulfat.

Penggunaan Se lebih reaktif dibandingkan dengan Hg dan CuSO4 tetapi kelemahan Se sangat cepat dioksidasi justru N2 ikut hilang.

Proses destruksi selesai apabila cairan sudah menjadi jernih.

2. Tahap Destilasi

[NH4]2SO4 dipecah menjadi amonia, NH3 dengan penambahan NaOH sampai alkalis.

Agar tidak terjadi superheating atau percikan cairan atau timbul gelembung gas yang besar perlu ditambahkan logam Zn. Untuk mengetahui destilasi sudah selesai perlu ditambah PP untuk mengetahui reaksi sudah asam.

Bila ditampung dengan HCl 0,1 N maka untuk mengetahui sisa HCl yang tidak bereaksi dengan ammonia dititrasi dengan NaOH 0,1 N menggunakan indikator mengsel.

% N = [{(mL NaOH blanko-mL Naoh sample)(0,1)(0,014)(factor pengenceran)}/mg sample]x100% 

Kadar protein = % N dikali faktor perkalian nitrogen 

 

Advertisements

Leave a Reply

Fill in your details below or click an icon to log in:

WordPress.com Logo

You are commenting using your WordPress.com account. Log Out / Change )

Twitter picture

You are commenting using your Twitter account. Log Out / Change )

Facebook photo

You are commenting using your Facebook account. Log Out / Change )

Google+ photo

You are commenting using your Google+ account. Log Out / Change )

Connecting to %s